带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。
分子间通过分子间作用力(根据人教版教材最新解释,分子间作用力又名范德华力,而氢键不是化学键,是一种特殊的分子间作用力,属于分子间作用力)构成的晶体。
构成微粒:分子。(特例:稀有气体为单原子分子。)
微粒间作用:a.分子间作用力,部分晶体中存在氢键。分子间作用力的大小决定了晶体的物理性质。分子的相对分子质量越大,分子间作用力越大,晶体熔沸点越高,硬度越大。b.分子内存在化学键,在晶体状态改变时不被破坏。c.分子间内部微粒采用紧密堆积方式排列。
电泳现象:
在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离(即迁移率)为常数,是该带电粒子的物化特征性常数[1] 。不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
在外加直流电源的作用下,胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动,这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离,这种技术也叫做电泳。胶体有电泳现象,证明胶体的微粒带有电荷。各种胶体微粒的本质不同,它们吸附的离子不同,所以带有不同的电荷。
电泳怎么都跑不出条带
与胶体电泳有关的因素有:
1、电场强度。
电场强度是指单位长度的电位降,也被称电势梯度。
电场强度对电泳速度起着正比作用,电场强度越高,带电颗粒移动速度越快。根据实验的需要,电泳可分为两种:一种是高压电泳,所用电压在500~1000V或更高。
由于电压高,电泳时间短(有的样品需数分钟),适用于低分子化合物的分离,如氨基酸,无机离子,包括部分聚焦电泳分离及序列电泳的分离等。
2、溶液的pH。
它决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。溶液的pH值决定带电物质的解离程度,也决定物质所带净电荷的多少.对蛋白质,氨基酸等类似两性电解质,pH值离等电点越远,粒子所带电荷越多,泳动速度越快,反之越慢。
因此,当分离某一种混合物时,应选择一种能扩大各种蛋白质所带电荷量差别的pH值,以利于各种蛋白质的有效分离.为了保证电泳过程中溶液的pH值恒定,必须采用缓冲溶液。
3、溶液的离子强度。
溶液的离子强度(Ion intensity)是指溶液中各离子的摩尔浓度与离子价数平方的积的总和的1/2.带电颗粒的迁移率与离子强度的平方根成反比。
低离子强度时,迁移率快,但离子强度过低,缓冲液的缓冲容量小,不易维持pH恒定.高离子强度时,迁移率慢,但电泳谱带要比低离子强度时细窄。通常溶液的离子强度在0.02~0.2之间。
4、电渗。
在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗。在电场中液体对于一个固体的固定相相对移动称为电渗。在有载体的电泳中,影响电泳移动的一个重要因素是电渗。最常遇到的情况是γ-球蛋白,由原点向负极移动,这就是电渗作用所引起的倒移现象。
产生电渗现象的原因是载体中常含有可电离的基团,如滤纸中含有羟基而带负电荷,与滤纸相接触的水溶液带正电荷,液体便向负极移动。由于电渗现象往往与电泳同时存在,所以带电粒子的移动距离也受电渗影响。
扩展资料:
目前所采用的电泳方法,大致可分为3类:显微电泳,自由界面电泳和区带电泳。区带电泳应用广泛,区带电泳可分为以下几种类型:
1、按支持物的物理性状不同,区带电泳可分为:
(1)滤纸为支持物的纸电泳。
(2)粉末电泳:如纤维素粉,淀粉,玻璃粉电泳。
(3)凝胶电泳:如琼脂,琼脂糖,硅胶,淀粉胶,聚丙烯酰胺凝胶电泳。
(4)缘线电泳:如尼龙丝,人造丝电泳。
2、按支持物的装置形式不同,区带电泳可分为:
(1)平板式电泳:支持物水平放置,是最常用的电泳方式。
(2)垂直板电泳:聚丙烯酰胺凝胶可做成垂直板式电泳。
(3)柱状(管状)电泳:聚丙烯酰胺凝胶可灌入适当的电泳管中做成管状电泳。
3、按pH的连续性不同,区带电泳可分为:
(1)连续pH电泳:如纸电泳,醋酸纤维素薄膜电泳。
(2)非连续pH电泳:如聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳。
百度百科——电泳
电泳跑不出条带的原因可能有很多,以下是一些可能的原因:
1. 样品中没有DNA,或者DNA太少,或者DNA已经降解。
2. DNA较小而电泳时间太长,导致DNA跑了出去。
3. DNA太大,还在加样孔附近,甚至还没有跑到胶里。
4. 酶失活或在反应体系中未加入酶。例如,Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往导致无法进行PCR扩增。
要解决这个问题,您可以根据原因尝试相应的解决方法,例如更换新酶或使用另一来源的酶,优化实验条件,确保样品中存在DNA等。
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